Университете Иллинойса исследователи достигли наивысших введения генов в клетки человека с помощью CRISPR-Cas9 в ген-редактирование системы, что является необходимым шагом для освоения ТРИФОСФАТЫ для клинической генной терапии приложения.
Химически перекручиваем концы ДНК должны быть вставлены, новый метод в пять раз эффективнее, чем существующие подходы. Исследователи увидели улучшения в различных генетических местах испытана в человеческой клеточной линии почки, даже видя, 65% вносимой на одном сайте, где предыдущий максимум был 15%.
Водить по химической и биомолекулярной инженерии профессор Чжао Хуэйминь, исследователи опубликовали свою работу в журнале Nature химической биологии.
Исследователи нашли ТРИФОСФАТЫ, чтобы быть эффективным инструментом, чтобы выключить, или «выбить», а Ген. Однако, в клетках человека, это не очень эффективный способ, чтобы вставить, или «стучать» гена.
«Хороший стук-в метод важен, как для ген-терапии приложениях и фундаментальных биологических исследований в изучении функции генов,» сказал Чжао, который ведет тему Дизайн биосистем на р. Везе Карл Института геномной биологии в Иллинойс. «С НОК-Ин способ, мы можем добавить ярлык для любого гена, изучение его функций и посмотреть, как выражение гена, страдающих от рака или изменений в структуре хромосомы. Или для генной терапии приложения, если у кого-то есть болезнь, вызванная отсутствием гена, мы хотим быть в состоянии, чтобы вставить его.»
Поиск способов повышения эффективности, группа Чжао посмотрел на 13 различных способов изменить вставленной ДНК. Они обнаружили, что небольшие изменения в ДНК увеличил скорость и эффективность вставки.
Затем исследователи проверили, вставив конец-модифицированных фрагментов ДНК различных размеров, в различных местах генома, используя метод CRISPR-Cas9 для точного выявления конкретных объектов для вставки. Они обнаружили эффективность двух до пяти раз, даже когда вставка больших фрагментов ДНК — самый сложный вставки сделать.
«Мы предполагаем, что эффективность улучшилось настолько, что химическая модификация к концу стабилизирует ДНК мы вводить», — сказал Чжао. «Как правило, при попытке переноса ДНК в клетку, он получает деградировали с помощью ферментов, которые разъедают ее с концами. Мы думаем, что наш химический дополнительно защищает концы. Больше ДНК в ядре, и что ДНК является более стабильным, поэтому я думаю, что он имеет высокие шансы быть интегрированы в хромосому».
Группа Жао уже использует метод, чтобы пометить необходимые гены в изучении функции генов. Они намеренно использовать готовые химические средства для изменения ДНК фрагментов, так что другие исследовательские группы могли бы использовать тот же метод для своих генетических исследований.
«Мы разработали довольно много стучать-в методах и в прошлом, но мы никогда не задумывались о том, чтобы с помощью химических веществ для увеличения стабильности ДНК, мы хотим вставить», — сказал Чжао. «Это простая стратегия, но она работает.»
сделать разницу: спонсорские возможности
Ответить
Хотите присоединиться к обсуждению?Не стесняйтесь вносить свой вклад!